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DH5α**感受态细胞

发布时间:2023-08-30 浏览量:90

产品使用信息

产品编号 PS0101-01
产品包装 10×100μl
价格 ¥252.00

❊产品简介:

DH5α**感受态细胞,英文名DH5α Super Competent Cells,是一种可以用于常规质粒**转化的质粒克隆用E. coli DH5α即用型化学感受态细胞。使用pUC19质粒进行热激活转化,转化效率可以高达1×109 cfu/μg DNA以上。
DH5α是实验室*为常用的大肠杆菌菌株之一,广泛用于基因克隆,蓝白筛选,质粒稳定扩增等分子生物学实验。
DH5α菌株的基因型为F- φ80 lacZΔM15 Δ(lacZYA-argF)U169 recA1 endA1 hsdR17(rk-, mk+) phoA, supE44 thi-1 gyrA96 relA1 λ-,该菌株缺失核酸内切酶(endA),提高了质粒DNA的产量和质量;重组酶缺陷型(recA) 减少插入片段的同源重组概率,保证了插入DNA的稳定性;lacZΔM15的表达使DH5α感受态可用于蓝、白斑筛选[1,2]。

❊操作方法:(以下操作均按无菌条件的标准进行)

1、将感受态细胞置于冰上融化,以下实验以100ul感受态细胞为例。

2、向感受态细胞悬液中加入需转化的目的DNA,注意目的DNA的体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一,轻轻旋转离心管以混匀内容物,冰浴放置30分钟。

3、将离心管置于42℃水浴中60-90秒,然后快速转移到冰浴中放置2-3分钟,注意不要摇动离心管。

4、向离心管中加入500ul无菌无抗的SOC或LB培养基,37℃ 180rpm振荡培养1小时。目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。

5、取适量已转化的感受态细胞涂布含相应抗生素的SOC或LB平板,37℃倒置培养12-16小时。涂布用量可根据具体实验来调整,如转化的DNA总量较多,可取100ul左右的转化产物涂板;反之,如转化的DNA总量较少,可取200-300ul的转化产物涂板。过多菌液可以抑制细菌生长。如果预计的克隆较少,可通过离心后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。涂布剩余的菌液可4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新的平板。

❊保存条件:

-70℃保存,液氮保存至少一年,-70℃保存至少6个月

❊注意事项:

1、感受态细胞应保存在-70℃,不可反复冻融,否则其转化效率将会降低。

2、实验过程中应严格无菌操作,防止其它DNA或杂菌的污染,避免为以后的筛选、鉴定带来影响。

3、转化时,转化效率与外源DNA的浓度在一定范围内成正比,但当加入的外源DNA量过多或体积过大反而会降低转化效率。转化时DNA体积要小于感受态细胞体积的十分之一。

4、转化率的计算:转化率=产生菌落的总数/铺板DNA总量。

5、为防止转化实验不成功,可以保留部分连接产物,以重新转化,将损失降到*低。

❊备注:以上数据均来自公开文献, 暂未进行独立验证, 仅供参考。

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